Hasta el momento, sigue siendo el tinte más utilizado en el diagnóstico médico y suele ser el estándar de oro.
La tinción con hematoxilina y eosina (H&E) es una de las principales productora de tintes en histología.
Este colorante no ha cambiado durante muchos años porque funciona bien con una variedad de fijadores y muestra una amplia gama de características de matriz citoplásmica, nuclear y extracelular.
La hematoxilina es un compuesto extraído del duramen del árbol de leña. La hematoxilina puede considerarse como un tinte básico. Se utiliza para teñir estructuras ácidas de un azul violáceo.
El ADN en el núcleo y el ARN en los ribosomas y en el retículo endoplásmico rugoso son ácidos, por lo que la hemotoxilina se une a ellos y los tiñe de color púrpura.
La hematoxilina sola no es técnicamente un tinte y no manchará directamente los tejidos.
Por lo tanto, debe usarse en combinación con un «mordiente», un compuesto que lo ayuda a unirse al tejido para formar un enlace tejido-mordiente-hematoxilina.
El mordiente utilizado es típicamente un catión metálico, como el aluminio.
La eosina es aniónica y actúa como un tinte ácido. Está cargada negativamente y tiñe las estructuras básicas (o acidófilas) de color rojo o rosa.
La mayoría de las proteínas en el citoplasma son básicas, por lo que la eosina se une a estas proteínas y las tiñe de rosa.
Esto incluye filamentos citoplásmicos en células musculares, membranas intracelulares y fibras extracelulares.
Como su nombre indica, la tinción H&E hace uso de una combinación de dos tintes, hematoxilina y eosina.
El tejido teñido con hematoxilina y eosina muestra teñido con citoplasma rosa-naranja y los núcleos teñidos de forma oscura, ya sea azul o púrpura.
La eosina también tiñe los glóbulos rojos de rojo intenso.
Tipos de métodos de tinción
- Tinción progresiva: cuando el tejido se queda en la mancha el tiempo suficiente para alcanzar el punto final adecuado. Las diapositivas deben examinarse a intervalos diferentes para determinar cuándo la tinción es óptima.
- Tinción regresiva: en este método, el tejido se cubre y luego se desecha (se diferencia) hasta que se alcanza el punto final adecuado.
Principio
El producto de oxidación de la hematoxilina es la hematina y es el ingrediente activo en la solución de tinción.
La hematoxilina no está clasificada como un tinte ya que la molécula no posee cromóforo.
La oxidación in situ de la hematoxilina se efectúa mediante la adición de un oxidante fuerte a la mancha, en este caso yodato de sodio.
La hematina muestra propiedades similares a los indicadores, siendo azul y menos soluble en condiciones alcalinas acuosas, y roja y más soluble en condiciones ácidas alcohólicas.
En condiciones ácidas, la hematina se une a los residuos de lisina de las histonas nucleares por medio de un enlace a través de un mordiente de ión metálico, en este caso el aluminio.
Para asegurar la saturación de los sitios de unión química, la tinción se aplica más tiempo del necesario, lo que resulta en el exceso de los tejidos con una coloración de fondo muy poco específica.
Esta coloración indeseable se elimina selectivamente mediante lixiviación controlada en una solución ácida alcohólica (alcohol ácido), y el proceso se denomina «diferenciación».
El detalle celular completo se obtiene por contraste con la mezcla de eosina.
Formas utilizadas de eosina
Hay tres formas comúnmente utilizadas de eosina:
- Eosina amarillenta (tetrabromofluoresceína, sal disódica CI 45380).
- Eosina azulada (el dinitobromato derivado CI 45400).
- Eosina Alcohol Soluble (el etil derivado CI 45386), la primera es la preferida.
La mejora del color se logra fortificando la mancha con phloxine, un miembro químico de la misma familia que la eosina (fluorosceinas halogenadas).
El mecanismo de su tinción no se comprende completamente, pero se cree que es de naturaleza electrostática.
Las visualizaciones más aceptables para el histólogo se obtienen aplicando los tintes en condiciones ácidas, por lo que se obtienen coloraciones específicas más intensas.
La tinción con hematoxilina y eosina (H&E) es una técnica bien establecida en histopatología. Sin embargo, la interpretación de la inmunohistoquímica (IHC) se realiza exclusivamente con hematoxilina.contratinción.
Estudio
Nuestro objetivo fue investigar el potencial de H&E como contratinción (H & E-IHC) para permitir la visualización de un marcador mientras se confirma el diagnóstico en la misma diapositiva.
La calidad de la inmunotinción y el rendimiento técnico rápido fueron los criterios principales para seleccionar el protocolo final.
Teñimos múltiples tejidos de diagnóstico con pruebas de IHC de clase I con diferentes marcadores de localización subcelular (anti-CK7, CK20, sinaptofisina, CD20, HMB45 y Ki-67).
También con doble tinción en tejidos de próstata con queratinas / p63 de alto peso molecular (Detección DAB) y p504s (detección de fosfatasa alcalina).
Para validar la eficacia de la contratinción, teñimos micromatrices de tejido del control de calidad de inmunohistoquímica canadiense ( cIQc) con pruebas de IHC de clase II (marcadores ER, PR, HER2 y p53).
La concordancia interobservador e intraobservador se evaluó mediante las estadísticas κ.
Se observó un excelente acuerdo de interpretación de H & E-IHC en comparación con el estándar IHC de nuestro laboratorio (κ, 0,87 a 1,00), y con los valores de referencia de cIQc (κ, 0,81 a 1,00).
El acuerdo interobservador e intraobservador fue excelente (κ, 0,89 a 1,00 y 0,87 a 1,00, respectivamente).
